GM501 Gradient 100 %

Zusammensetzung:

• GM501 Gradient 100 % besteht aus einer kolloidalen Suspension von Silikatpartikeln, die mit hydrophilen Silanen stabilisiert ist.

Produktspezifikationen und Qualitätskontrolle:

• Es werden Rohmaterialien mit dem höchsten verfügbaren Reinheitsgrad gemäß Pharmacopoeia (EUR, US) eingesetzt.
• Ein Chargen-Analysen-Zertifikat sowie ein Sicherheitsdatenblatt können auf Wunsch von unserer Website abgerufen werden.
• GM501 Gradient 100 % wird gemäß folgenden Spezifikationen hergestellt und getestet:

Gebrauchsempfehlung:

• Wichtig: Jedes Labor sollte seine eigenen optimierten und validierten Laborverfahren anwenden.

Gebrauchsempfehlung für die Zubereitung des Gradienten:

• Die Gradienten durch 5-maliges Invertieren der Flaschen gut durchmischen.
• Es wird empfohlen, aus dem 100 % Gradienten ein Zwei-Phasen-System, bestehend aus dem 45 %igen und dem 90 %igen Gradienten, zuzubereiten. Wenn Sie ein anderes Mischungsverhältnis bevorzugen, kann dieses ebenfalls aus dem 100 % Gradienten zubereitet werden (z.B. 45 %-70 %-90 %).
• Mischen Sie 9 Anteile GM501 Gradient 100 % mit 1 Anteil Waschmedium (HEPES-gepuffert EBSS-basiert), um den 90 % Gradienten zuzubereiten.
• Mischen Sie 4,5 Anteile GM501 Gradient 100 % mit 5,5 Anteilen Waschmedium (HEPES-gepuffert EBSS-basiert), um den 45% Gradienten zuzubereiten.

Hinweis: Frisch zubereitetes Gradienten-Medium muss immer unter sterilen und hygienischen Bedingungen verpackt und zubereitet werden (z.B. Laminar-Flow bzw. LAF-Bench, ISO-Klasse 5). Für optimale Ergebnisse bereiten Sie die Gradienten maximal 24 Stunden vor dem Gebrauch zu und lagern diese bei 2°C-8°C. Die Gradienten eine Stunde vor Gebrauch auf Raumtemperatur oder 37°C erwärmen und nach der Verdünnung gut durchmischen.

Ermittlung der g-Belastung:

• Die g-Belastung Ihrer Zentrifuge kann mittels dieser Formel berechnet werden:

g = 1.118 x r x rpm2 or rpm = Square root {g/ (1.118 x r)}

r = Radius der Zentrifuge in mm
rpm = Rotation pro Minute/1000

Beispiel 1
r = 150 mm
rpm = 1200 Rotation pro Minute
g = 1.118 x 150 x 1.44 = 242 g

Beispiel 2
r = 150 mm
g = 300 g

rpm = SQR {300/ (1.118 x 150)} = 1.33
rpm = 1330 Rotation pro Minute

Gebrauchsempfehlung der Aufbereitung mit frischen Spermaproben: Beispiel mit einem 45% und einem 90% Gradienten

(andere Mischungsverhältnisse sind möglich)

1. Pipettieren Sie 2,5 ml des geringeren Dichtegradienten (45 %) in ein steriles Zentrifugenröhrchen.
2. Unterschichten Sie mit einer 3 cc Spritze mit einer 1 1/2” 21 g Nadel 2,5 ml des höheren Dichtegradienten (90 %) luftblasenfrei unter den geringeren Gradienten. Die beiden Dichten müssen merklich voneinander getrennt sein. Sie erreichen dieses, indem Sie die Nadelspitze zum Boden des Zentrifugenröhrchens führen und dort den höheren Dichtegradienten langsam platzieren. Diese beiden unterschiedlichen Dichte-Schichten sind für ca. zwei Stunden stabil.
3. Geben Sie anschließend vorsichtig bis zu 2,5 ml verflüssigtes Sperma mit einer Transferpipette oder einer Spritze auf den 45% Gradienten. Verwenden Sie kein höheres Volumen als das Volumen der einzelnen Gradientenschichten oder mehr als 109 Zellen.
4. Danach bei 350-400 g für ca. 15-18 Minuten zentrifugieren. Wenn nach dieser Zeit kein Pellet erkennbar sein sollte, sollten Sie weitere 3-5 Minuten zentrifugieren.
5. Aspirieren Sie den Überstand ab.
6. Resuspendieren Sie das Pellet mit 2-3 ml frischem Waschmedium mit Hilfe einer Spritze.
7. Zentrifugieren Sie für weitere 8-10 Minuten bei 300 g.
8. Bei höheren Spermienkonzentrationen ist es empfehlenswert, die kompletten 10 Minuten zu zentrifugieren.
9. Saugen Sie den Überstand ab und wiederholen Sie die Arbeitsschritte 6 und 7.
10. Den Überstand entfernen und durch ein passendes Volumen eines geeigneten Mediums ersetzen.

Wenn die Proben sich nicht verflüssigen und deshalb die Schichten nicht passieren, hilft eine Erhöhung der Zentrifugalkraft bis zu 500 g (aber nicht mehr), die Spermien zu separieren.

Gebrauchsempfehlung der Aufbereitung mit gefrorenen Spermaproben: Beispiel mit einem 45% und einem 90% Gradienten

(andere Mischungsverhältnisse sind möglich)

1. Pipettieren Sie 1 ml des geringeren Dichtegradienten (45 %) in ein steriles Zentrifugenröhrchen.
2. Unterschichten Sie mit einer 3 cc Spritze mit einer 1 1/2” 21 g Nadel 1 ml des höheren Dichtegradienten (90 %) luftblasenfrei unter den geringeren Gradienten. Die beiden Dichten müssen merklich voneinander getrennt sein. Sie erreichen dieses, indem Sie die Nadelspitze zum Boden des Zentrifugenröhrchens führen und dort den höheren Dichtegradienten langsam platzieren. Diese beiden unterschiedlichen Dichte-Schichten sind für ca. zwei Stunden stabil.
3. Geben Sie anschließend vorsichtig maximal 0,5 ml aufgetautes Sperma mit einer Transferpipette oder einer Spritze auf den 45% Gradienten.
4. Danach bei 350 g für ca. 15-20 Minuten zentrifugieren.
5. Den Überstand nicht weiter als bis zur 0.5 ml-Markierung über dem Pellet entfernen.
6. Resuspendieren Sie das Pellet mit 2-3 ml frischem Waschmedium mit Hilfe einer Spritze.
7. Zentrifugieren Sie für weitere 8-10 Minuten bei 300 g.
8. Saugen Sie den Überstand ab und wiederholen Sie Schritt 6 und 7.
9. Den Überstand entfernen und durch ein passendes Volumen eines geeigneten Mediums ersetzen.

Sicherheitshinweise und Vorsichtsmaßnahmen:

• Alle Proben sind so zu handhaben, als ob sie HIV oder Hepatitis übertragen könnten.
• Bei der Handhabung von Proben ist stets Schutzkleidung zu tragen.
• Stets unter streng aseptischen Bedingungen arbeiten, um eine mögliche Kontamination zu vermeiden.
  Auftretende schwerwiegende Vorkommnisse (nach der Definition der Europäischen Medizinprodukteverordnung 2017/745) müssen Gynemed und gegebenenfalls der zuständigen Behörde des EU-Mitgliedstaats, in dem der Anwender und/oder Patient niedergelassen ist, gemeldet werden.
• Nur für den bestimmungsgemäßen Gebrauch.

Prüfung vor Anwendung:

• Benutzen Sie das Produkt nicht, wenn es verfärbt oder trüb ist oder wenn es irgendeine Form von mikrobiotischer Kontamination aufweist.
• Benutzen Sie das Produkt nicht, wenn im Lieferzustand der Verschluss oder die Verpackung geöffnet oder beschädigt sind.
• Benutzen Sie das Produkt nicht, wenn das Verfallsdatum abgelaufen ist.
• Vor Gebrauch nicht einfrieren.
• Nach dem Öffnen nicht erneut sterilisieren.
• Nehmen Sie die benötigte Menge des Mediums unter aseptischen Bedingungen in einem sterilen Behälter heraus, je nach der Anzahl der an einem Tag durchzuführenden Verfahren. Dies ist notwendig, um mehrfache Öffnungs-/Erwärmungszyklen des Mediums zu vermeiden. Überschüssige (nicht verwendete) Medien sind zu entsorgen

Aufbewahrungshinweise und Haltbarkeit:

• Haltbarkeit 18 Monate ab Herstellung.
• Lagern Sie die Produkte vor dem ersten Gebrauch zwischen 2-25°C, nach dem Öffnen bei 2-8°C.
• Das Produkt kann nach dem Öffnen bis zu 7 Tage lang ohne Sicherheitseinbußen verwendet werden, sofern sterile Bedingungen gewährt bleiben und das Produkt bei 2-8°C aufbewahrt wird.
• Nach dem Transport für maximal 5 Tage stabil bei Lagerung unter erhöhten Temperaturen (≤ 37°C).
• Das Produkt muss in Übereinstimmung mit den örtlichen Vorschriften für die Entsorgung von Medizinprodukten entsorgt werden.
  Von Sonnenlicht fernhalten.