SpermVD

Découvrez  davantage sur l’ utilisation du SpermVD au travers de ce webinaire de Gynemed et MFC Global en collaboration avec le Dr. Arie Berkovitz et Miki Belenky.

N’hésitez pas à nous contacter pour plus d’informations.

Vitrification

Dans une boîte de Petri, les spermatozoïdes individuels sont d’abord recueillis dans de petites gouttes de milieu de lavage des spermatozoïdes (par exemple GM501 SpermAir) sous enrobage d’huile.

À l’aide d’une pince stérile, retirez le SpermVD de l’emballage dans des conditions stériles et placez-le sur une surface stérile (p. ex. une boîte de Petri ou un couvercle de boîte de Petri).

Préparez une solution de travail du milieu de congélation du sperme (à partir du milieu de lavage et de congélation, p. ex. 30 μl GM501 SpermAir et 21 μl GM501 SpermStore (1: 0,7) pour la solution de congélation. Trois gouttes de 0,5 à 1 μl sont ajoutées aux puits de SpermVD appropriés. Transférez immédiatement le SpermVD dans la boîte de Petri (élément 1). Il convient de noter que les gouttes doivent être recouvertes d’huile.

À l’aide d’un micromanipulateur et d’une pipette ICSI préremplie de solution PVP, les spermatozoïdes individuels sont transférés dans une ou plusieurs gouttes de congélation.

Congelez le SpermVD chargé de sperme dans les 10 minutes suivant l’ajout de la première cellule.

À l’aide d’un micromanipulateur et d’une pipette ICSI préremplie de solution PVP, les spermatozoïdes individuels sont transférés dans une ou plusieurs gouttes de congélation. Congelez le SpermVD chargé de sperme dans les 10 minutes suivant l’ajout de la première cellule. À l’aide d’une pincette stérile, distribuez soigneusement le SpermVD contenant le sperme provenant de la boîte de Petri (en laissant bien s’écouler l’excès d’huile) dans un cryotube de 1,8 à 3,6 ml étiqueté de façon cryogénique. Recommandation : ne fermez pas hermétiquement le tube afin que l’azote liquide y pénètre progressivement et ne remplissez pas le tube rapidement après qu’il a été placé dans l’azote liquide, ce qui permet une manipulation sûre des cryotubes avec le SpermVD. Transférez le cryotube avec le SpermVD directement dans l’azote liquide pour un stockage à long terme.

Décongélation

Préparez une boîte de Petri (50-100 mm) avec des gouttes de PVP et des gouttes issues du milieu de lavage du sperme (p. ex. GM501 SpermAir) avec une couche d’huile (boîte de transfert).

Portez le cryotube directement à température ambiante avec l’azote liquide du SpermVD et laissez le tube fermé pendant 5 minutes à température ambiante.

Retirez le sperme du cryotube à l’aide d’une pince stérile et placez-le dans le bol de transfert. Les gouttes contenant le sperme doivent être recouvertes d’huile.

À l’aide d’un micromanipulateur et d’une pipette ICSI, transférez le sperme dans les gouttes de milieu de lavage des spermatozoïdes à un grossissement de 20 fois par rapport au SpermVD.